產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Elabscience® One-step TUNEL Flow Cytometry Apoptosis Kit 是一款靈敏度高且能快速簡(jiǎn)便地檢測細胞凋亡的產(chǎn)品。本試劑盒可通過(guò)流式細胞儀來(lái)進(jìn)行懸浮細胞、貼壁細胞的流式凋亡檢測。

檢測原理：

細胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì )激活一些特異性的 DNA 內切酶，這些內切酶會(huì )切斷核小體間的基因組 DNA。使得凋亡細胞的DNA被切割成180~200bp片段，在瓊脂糖凝膠上通常以180~200bp的階梯狀遷移。細胞經(jīng)過(guò)固定破膜后，TdT 酶 （脫氧核糖核酸末端轉移酶）將熒光標記的 dUTP 連接到細胞斷裂DNA暴露的3'-OH 末端，通過(guò)流式細胞儀檢測dUTP偶聯(lián)物發(fā)出的熒光信號，從而來(lái)檢測晚期凋亡。

保存條件：

-20°C 保存，保質(zhì)期一年。Labeling Solution 需避光保存，Labeling Solution、Fixation Buffer、Permeabilization Buffer 需避免反復多次凍融，建議分裝保存。

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法：

1. 細胞碎片較多

可能原因：

固定不充分，破膜導致細胞破碎。破膜時(shí)間過(guò)久，破膜溫度較高。

解決方法：

適當延長(cháng)固定的時(shí)間，充分固定細胞后再破膜。破膜時(shí)間應控制在 10 min，最長(cháng)不超過(guò) 15 min，保證在冰上破膜。

2. 未檢測到凋亡細胞群

可能原因：

細胞誘導凋亡失敗。細胞數目較多，細胞透膜不che底。用含有EDTA 等蝥合劑的試劑洗滌細胞，導致 TdT 酶失效。

解決方法：

設置不同的濃度梯度和誘導時(shí)間，找到合適的誘導條件。

適當調整細胞數量，或增加Permeabilization Bufer 的劑量，合理充分破膜。

使用不含螯合劑的洗滌液。

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