Takara是一家總部位于日本京都的生物醫藥企業(yè)，起源于1841年，正式創(chuàng )立于1925年。該公司主要從事研究試劑、科學(xué)儀器、保健食品以及基因和細胞治療產(chǎn)品（CDMO）的研發(fā)和銷(xiāo)售。

對于生命科學(xué)工作者來(lái)說(shuō)，Takara應該不陌生，其提供的限制性?xún)惹忻负途酆厦甘菍?shí)驗室中常用試劑。Takara也是世界上shou批提供生命科學(xué)科研用試劑以及商用PCR儀器和試劑的企業(yè)。

TaKaRa逆轉錄試劑盒是一種將RNA逆轉錄為cDNA的專(zhuān)用試劑。RNA的純度可以影響cDNA的合成量，而制備RNA的關(guān)鍵就是要抑制細胞中的RNA裂解酶，并防止所用儀器和試劑中RNA裂解酶的污染。因此，在實(shí)驗中必須采取以下措施：戴一次性干凈手套；使用RNA操作專(zhuān)用實(shí)驗臺；在操作過(guò)程中避免講話(huà)等等。通過(guò)以上辦法可以防止實(shí)驗者的汗液、唾液中的RNA分解酶的污染。制品中附加了標準曲線(xiàn)制作用稀釋液EASY Dilution(for Real Time PCR)將Total RNA或cDNA稀釋至低濃度時(shí)也能夠進(jìn)行準確稀釋?zhuān)菀自趯拸V范圍內獲得準確定量的標準曲線(xiàn)。

提取的Total RNA中常?；煊谢蚪MDNA，而基因組DNA可以直接作為PCR模板進(jìn)行擴增，造成解析結果不準確。為了避免這種情況發(fā)生，我們必須采取如下兩種措施：1、引物設計時(shí)避免基因組DNA擴增；2、使用DNase I處理除去基因組DNA。

1、引物設計時(shí)避免基因組DNA擴增

我們可以利用基因組DNA具有外顯子和內含子的結構，在引物設計上下工夫，使PCR反應時(shí)不能擴增基因組DNA。此時(shí)我們首先應確認目的基因的基因組結構，選擇較長(cháng)的內含子。然后，在這個(gè)內含子兩側的外顯子上分別設計上、下游引物。Real Time PCR反應時(shí)通常擴增的目的DNA片段長(cháng)度都比較短設置的條件也是適合短片段DNA的擴增，超過(guò)500bp就很難擴增了。所以，當內含子足夠長(cháng)時(shí)，基因組DNA來(lái)源的擴增就不能發(fā)生：當內含子較短時(shí)，基因組DNA來(lái)源的擴增可能發(fā)生，但基因組DNA來(lái)源的擴增產(chǎn)物比mRNA來(lái)源的擴增產(chǎn)物長(cháng)，可通過(guò)分析融解曲線(xiàn)的方法加以區分。但是，此種方法不適合具有單個(gè)外顯子的基因、或者不具有內含子的生物種以及基因組情報沒(méi)被解析的生物種等，此時(shí)必須采取方法2解決。

2、使用DNase I處理除去基因組DNA

使用常規方法提取Total RNA后，再使用DNase I分解混入的基因組DNA，最后進(jìn)行苯酚/氯仿抽提乙醇沉淀等純化Total RNA。

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